摘要：狂犬病是一种致命的人畜共患病，全球每年约导致 59,000 人死亡，一旦病毒侵入中枢神经系统，死亡率几乎高达 100%。 本文将从狂犬病病毒的感染机制、临床表现、流行病学特征以及当前的预防策略等方面进行详细阐述，重点介绍狂犬病疫苗的发展现状和未来趋势，旨在为读者提供全面且通俗易懂的狂犬病防控知识。一、认识狂犬病病毒（一）病毒的基本结构
狂犬病病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，其形态呈子弹状或棒状，具有包膜。病毒的基因组为单链负义 RNA，长度在 11,615~11,966 个核苷酸之间。该基因组包含五个高度保守的基因，分别编码核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、糖蛋白（G）和大结构蛋白（L）。其中，核蛋白包裹 RNA 形成核衣壳，具有螺旋对称性；糖蛋白形成突起于包膜表面的 knob-like spikes，在病毒感染宿主细胞的过程中发挥关键作用；大结构蛋白 L 与磷蛋白 P 相互作用，形成 RNA 依赖的 RNA 聚合酶复合物，负责病毒的复制和转录（图 1）。
（二）独特的致病机制
狂犬病病毒的致病过程具有独特性。病毒通过感染动物的咬伤、抓伤或舔舐破损皮肤、黏膜等途径进入人体。病毒的糖蛋白 G 首先与宿主骨骼肌神经肌肉接头处的烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）结合，随后通过内吞途径进入宿主细胞。在细胞内，低 pH 值触发病毒包膜与宿主细胞膜融合，释放病毒基因组进入细胞质。
病毒最初仅在骨骼肌或皮肤细胞中复制，随后通过运动终板进入轴突，以每天 5~100 毫米的速度沿轴突逆行运输，最终感染中枢神经系统（脑和脊髓）。从感染部位到中枢神经系统的传播时间因咬伤部位与中枢神经系统的距离、患者免疫反应以及病毒数量等因素而异，通常为数天、一个月甚至更长时间。
在病毒复制过程中，磷蛋白 P 可作为干扰素拮抗剂，降低宿主的先天免疫反应，帮助病毒逃避免疫系统的攻击。当病毒侵入中枢神经系统后，会迅速扩散，导致中枢神经元坏死和神经胶质细胞损伤，引发严重的生理和病理变化。此外，病毒还会从中枢神经系统扩散至其他器官，尤其是唾液腺，使得病毒能够通过感染动物的唾液传播给人类。
（三）临床症状的发展阶段
狂犬病的症状随着疾病进展逐渐加重，主要可分为以下三个阶段：
潜伏期：通常为 1~3 个月，但也可能短至几天或长达数年。潜伏期的长短取决于咬伤部位与大脑的距离、患者的免疫反应以及病毒的数量。
前驱期：潜伏期过后，症状开始出现，包括发热、疲劳、头痛、受伤部位刺痛、麻木、灼烧感、不适、食欲不振，有时还会出现类似流感的症状，该阶段持续 2~10 天。
神经系统症状期（发作期）：进入发作期后，患者会出现神经系统症状，通常分为狂躁型和麻痹型。
狂躁型（约占 80% 的病例）：表现为极度烦躁、恐水（看到或听到水流声可引发抽搐）、恐风（对风或气流过度敏感，甚至空气流动也会引起疼痛）、无法吞咽、流涎过多、幻觉、过度兴奋、攻击性和异常行为。此阶段可能持续数小时或数天，之后患者会进入兴奋期而非持续的烦躁状态。
麻痹型（约占 20% 的病例）：症状包括肌肉无力、逐渐麻痹（通常从咬伤部位开始），并逐渐陷入昏迷，最终死亡。麻痹型狂犬病患者相对安静，症状进展缓慢，病程稍长，从咬伤肢体附近的刺痛或麻痹开始，向上延伸导致四肢瘫痪。
（四）宿主、储存宿主和传播媒介
狂犬病病毒的宿主范围广泛，包括所有哺乳动物。常见的宿主有狗、猫等家养动物以及牛、马、羊等牲畜；野生动物宿主包括蝙蝠、浣熊、狐狸、臭鼬和猫鼬等。
狂犬病的储存宿主是指在特定区域内能够维持和传播病毒，且自身不会高频率因感染而死亡的物种。蝙蝠是全球重要的储存宿主，携带多种狂犬病病毒；在亚洲和非洲，狗是主要的储存宿主，也是导致大多数人类狂犬病病例的原因；在北美、欧洲和澳大利亚，浣熊、臭鼬、狐狸和蝙蝠等野生动物是主要的储存宿主；在拉丁美洲，蝙蝠（主要是普通吸血蝙蝠）和有时狐狸等野生食肉动物是主要储存宿主。
狂犬病病毒的传播媒介包括任何感染病毒的哺乳动物，主要传播媒介有：
狗：是将狂犬病传播给人类的主要媒介，占全球人类狂犬病死亡人数的 99% 以上。
家养动物：如 livestock 或猫，在罕见情况下也可传播。
野生动物：包括蝙蝠、狐狸、浣熊和臭鼬等。
（五）流行病学特征与防控现状
狂犬病主要通过狂犬病动物的咬伤或舔舐传播，在亚洲、非洲和拉丁美洲的发展中国家广泛流行，尤其是在狗群中狂犬病控制较差的地区。世界卫生组织（WHO）的数据显示，亚洲和非洲占全球每年狂犬病死亡人数的 95% 以上。据估计，全球每年约有 59,000 人死于狂犬病，其中 90% 以上的病例是由狗咬伤引起的，大多数死亡发生在资源有限和疫苗短缺的地区。
目前，狂犬病毒属可分为两个进化群：进化群 I 包括狂犬病病毒、澳大利亚蝙蝠狂犬病毒、杜文海格病毒、欧洲蝙蝠狂犬病毒 1 型、欧洲蝙蝠狂犬病毒 2 型、阿拉万病毒、胡占德病毒、科塔拉赫蒂蝙蝠狂犬病毒、博克勒蝙蝠狂犬病毒、伊尔库特病毒、台湾蝙蝠狂犬病毒和甘诺鲁瓦蝙蝠狂犬病毒；进化群 II 包括莫科拉病毒、拉各斯蝙蝠病毒和希莫尼蝙蝠病毒。此外，西高加索蝙蝠病毒、伊科马狂犬病毒和莱里达蝙蝠狂犬病毒不属于这两个进化群。这些病毒在神经嗜性、致病性、诱导细胞凋亡、免疫原性等方面存在差异。
疫苗接种是控制动物和人类狂犬病的有效策略之一。由于人类狂犬病主要由狗狂犬病引起，通过对狗进行疫苗接种和种群控制，有望减少人类狂犬病的发生。然而，目前控制蝙蝠传播的狂犬病毒是一个复杂的挑战，蝙蝠狂犬病对人类和动物健康的威胁日益增加。
二、动物狂犬病的预防（一）传统疫苗
灭活疫苗：通过物理或化学方法（如过氧化氢、二元乙基亚胺、乙基亚胺等）灭活病毒，保留病毒的免疫原性而不具有致病性。接种后，动物体内可产生特异性免疫反应，预防狂犬病病毒感染，历史上广泛应用于家养和伴侣动物。
减毒活疫苗：是毒力降低的狂犬病病毒，不具有致病性但仍具有免疫原性，能在动物体内产生更有效且相对持久的免疫保护。通常用于控制野生动物中的狂犬病，但由于含有活病毒，使用时需要严格控制，以避免病毒恢复致病性。
重组疫苗：利用基因工程技术，将狂犬病病毒的某些基因片段插入无害的载体中，使这些载体在动物体内产生类似于狂犬病病毒的免疫反应。具有免疫效果好、生产成本低、安全性高的优点，可避免疫苗引起疾病的风险。
（二）传统疫苗面临的挑战
尽管狂犬病疫苗在动物中的有效性已得到充分证明，但全球动物疫苗接种率仍然不足，其实际保护效果也因一些限制因素而难以评估（表 2）。这些限制因素包括：
接种覆盖率不足：由于交通、费用和接种不便等原因，尤其是在一些低收入和资源有限的国家，动物疫苗接种覆盖率仍然较低。一些地区的经济条件和公共卫生基础设施限制了动物疫苗的普及，给动物狂犬病的预防和控制带来巨大挑战。
安全性问题：个别动物可能会出现超敏反应或不良反应。特别是减毒活疫苗可能会发生逆转或自发突变，导致动物疾病，甚至造成环境污染。
长期有效性存疑：动物疫苗的长期效力和效价是一个问题，尤其是灭活疫苗。
诱导的抗病毒抵抗力存在差异：抗体的产生受多基因控制，狂犬病疫苗可能在高抗体应答者和低抗体应答者动物中诱导不同的抗病毒抵抗力。
口服抗性：在野外，不同宿主物种对狂犬病疫苗的摄取效率不同，且野外环境恶劣，动物胃肠道中富含蛋白酶，影响疫苗效果。
冷链要求：动物狂犬病疫苗的运输和储存需要维持冷链，这在偏远地区尤其是没有电力的地方非常困难。
（三）新型动物狂犬病疫苗的发展
使用佐剂的灭活狂犬病疫苗
2023 年，Yu 等人使用 PIKA（一种与 Toll 样受体 - 3（TLR-3）相互作用的稳定双链 RNA）作为佐剂来增强狂犬病免疫。他们发现这种 PIKA 狂犬病疫苗在感染中国流行的七种狂犬病病毒株的小鼠中，无需免疫球蛋白即可显示出超过 80% 的保护效力。与 licensed 狂犬病疫苗相比，PIKA 狂犬病疫苗在接种后仅 5 天就诱导出更多的中和抗体，并显著增加了响应抗原产生 IFN-γ 的 T 细胞数量，同时注射部位的 IL-1β、IL-6、CCL-2 和 TNF-α 水平升高，血清中的趋化蛋白和促炎分子水平也升高。通过 TLR3 基因敲除小鼠的实验进一步证实，PIKA 的作用依赖于 TLR3 途径，表明 PIKA 狂犬病疫苗有可能成为一种非常有效的狂犬病疫苗。
2024 年，Sokol 等人评估了在小鼠中添加基于重组鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的佐剂是否会增强灭活狂犬病疫苗的保护活性。他们使用一系列添加不同稀释度佐剂的狗和猫用灭活干培养疫苗 “Rabikan”（Shchelkovo-51 株）进行动物研究，并以不含佐剂的类似系列灭活干培养疫苗作为对照。通过 NIH 效力试验评估灭活狂犬病疫苗制剂的保护活性，结果显示，与不含佐剂的疫苗（3.75 IU/mL）相比，与佐剂共同给药的狂犬病疫苗的比活性值显著更高（48.69 IU/mL），表明重组鞭毛蛋白有可能作为狂犬病疫苗成分中的有效佐剂。
2024 年，Zhou 等人开发了单针疫苗以减少免疫次数。他们首先设计了以狂犬病病毒 G 蛋白为抗原的疫苗，使用动态逐层薄膜作为可侵蚀涂层，作为时间控制释放系统，实现 G 蛋白的多次脉冲释放。结果发现，与相应的多剂量普通疫苗相比，单针疫苗诱导出更强的体液和细胞免疫反应。此外，他们还设计了第二种以香菇多糖为佐剂的单针疫苗，结果显示，该单针疫苗也比相应的多剂量普通疫苗引发了更多的体液和细胞免疫反应，且由于香菇多糖能够增强免疫反应，第二种单针疫苗在抑制狂犬病病毒方面比第一种更有效。
口服减毒狂犬病疫苗
2023 年，Megawati 等人评估了在印度尼西亚巴厘岛给当地狗口服第三代减毒活狂犬病疫苗（病毒株 SPBN GASGAS）后的免疫原性。研究人员给狗直接口服狂犬病疫苗或提供含有疫苗小袋的鸡蛋味诱饵，并将其体液免疫反应与另外两组狗进行比较：一组接受肠外灭活狂犬病疫苗，另一组为未接种的对照组。在接种前和接种后 27~32 天分别对这些狗进行采血，并检测血样中是否存在病毒结合抗体。结果发现，三组接种狗的血清转化率相似：诱饵组为 88.9%；直接口服组为 94.1%；肠外组为 90.9%；对照组为 0%。口服和肠外接种狗之间的抗体水平没有显著差异，表明在野外条件下，这种第三代减毒活狂犬病疫苗与肠外疫苗相比能够引发足够的免疫反应，证明口服狂犬病疫苗有可能成为大规模狗疫苗接种计划中针对难以接触的流浪狗的重要工具。
基于 mRNA 的狂犬病疫苗
2022 年，Li 等人使用优化的表达 RABV-G 的 mRNA 疫苗构建体（LVRNA001），并在小鼠和狗中评估其免疫原性和保护能力。他们发现 LVRNA001 在小鼠中诱导中和抗体产生和强烈的 Th1 细胞免疫反应，并证明 LVRNA001 在小鼠和狗中均能提供针对 50 倍半数致死量（LD50）狂犬病病毒攻击的保护。保护效力试验表明，在小鼠中，给药间隔（14 天）比 3 天或 7 天的间隔诱导更多的抗体。最后，他们评估了接受两剂 25 µg LVRNA001 的狗在暴露后免疫预防狂犬病病毒的存活率，并与三个月内接受五剂灭活疫苗的狗进行比较，结果显示 LVRNA001 组的存活率（100%）显著高于灭活疫苗对照组（33.33%），表明 mRNA 疫苗可以为狂犬病提供新的预防策略。
2023 年，Hellgren 等人使用两剂脂质纳米粒配制的未修饰 mRNA 疫苗，编码狂犬病病毒糖蛋白 G（RABV-G），在非人灵长类动物的血液中诱导 RABV-G 特异性浆母细胞和 T 细胞，以及骨髓中的浆细胞。与两剂 licensed 狂犬病疫苗 Rabipur® 相比，动物体内 RABV-G 特异性浆母细胞和 T 细胞的水平更高。此外，mRNA 疫苗产生的 RABV-G 结合和中和抗体滴度均高于 Rabipur®，尽管 mRNA 和 Rabipur® 疫苗的反应的体细胞超突变程度和克隆多样性相似。mRNA 疫苗诱导的更高总体抗体滴度可以提高相关狂犬病毒株的交叉中和能力，表明 mRNA 有希望成为开发针对狂犬病病毒的广泛保护性疫苗的平台。
三、人类狂犬病的预防（一）当前疫苗
狂犬病一旦病毒侵入中枢神经系统几乎是致命的，因此预防病毒感染至关重要。以前，最常用的人类狂犬病疫苗是灭活疫苗，如果感染者在暴露后及时接种狂犬病疫苗，可以预防 99% 的死亡。主要有两种疫苗接种策略：暴露前预防和暴露后预防。
暴露前接种可以保护狗等家养动物和其他宠物免受狂犬病病毒感染，从而降低人类感染的风险，也建议经常接触动物的人（如兽医、动物救援人员或野外工作者）以及生活在难以到达且远离卫生中心、与蝙蝠种群密切接触的地区（如亚马逊地区的国家）的人进行暴露前接种。而暴露后接种是普通人的重点策略，建议被狂犬病动物咬伤或抓伤的人接种。伤口应立即清洗，然后接种狂犬病疫苗。目前，高度怀疑狂犬病的患者需要及时注射暴露后免疫球蛋白和疫苗，以防止病毒进入中枢神经系统。
目前广泛用于人类和动物暴露后预防狂犬病的疫苗或免疫球蛋白主要分为三种类型（表 3）：
细胞培养疫苗（CCV）：包括人二倍体细胞培养狂犬病疫苗（HDCV）、仓鼠肾细胞疫苗（HKCV）、Vero 细胞疫苗和纯化鸡胚细胞培养狂犬病疫苗（PCECV），均能赋予针对狂犬病病毒感染的保护性免疫力。
抗狂犬病血清：是含有中和狂犬病病毒特异性免疫球蛋白的制剂，在感染狂犬病病毒后与疫苗联合使用，尤其是用于严重暴露如深咬伤且从未接受过抗血清和疫苗的患者。
狂犬病免疫球蛋白：用于被狂犬病动物暴露的人作为暴露后预防，仅用于从未接种过狂犬病疫苗的人，提供直接的抗体保护，用于暴露后紧急情况，促进患者在体内产生自身抗体之前得到有效保护。
（二）当前疫苗的缺点
疫苗接种是控制狂犬病的好方法，但也面临一些挑战，如不同疫苗类型的安全性、免疫原性、暴露后预防的经济障碍以及教育和全面意识的有限。此外，冷链要求可能是狂犬病疫苗使用的障碍。
人类狂犬病疫苗广泛用于预防狂犬病病毒感染，但也存在一些影响甚至阻碍疫苗推广和分发的缺点，包括免疫反应不完全、副作用、需要多次接种、费用高、疫苗供应不足和冷链要求（表 4）。
（三）新型人类狂犬病疫苗的发展
尽管人类狂犬病疫苗已使用多年，但在特定情况下，疫苗接种仍无法保护一些感染患者。在一些资源有限的地区，疫苗的分发和推广仍然困难。因此，需要开发新的疫苗来改善延迟的抗体反应和较弱的细胞免疫，以提供全面保护，同时降低成本并提高接种的便利性。最近，更有效、更安全、更耐热和更便宜的人类狂犬病疫苗已被开发或正在开发中。
1.基于 Vero 细胞的狂犬病疫苗
Vero 细胞（绿猴肾细胞）是一种连续非整倍体细胞系，具有许多分裂周期而不衰老的特点。与其他哺乳动物细胞不同，Vero 细胞在感染病毒时不分泌干扰素 α/β，因为其干扰素分泌基因存在缺陷，但它们仍然具有干扰素 α/β 受体（IFNARs），并且在向培养基中添加干扰素时可以做出反应。Vero 细胞不含动物或人类成分，残留 DNA 含量低，因此被广泛用于病毒感染分子机制的研究和疫苗生产，如纯化 Vero 细胞培养冻干狂犬病疫苗（PVRV）。
2022 年，Quiambao 等人在 Vero 细胞中开发了一种狂犬病疫苗候选株（PVRV-NG），并在暴露前方案中与 licensed 人二倍体细胞培养狂犬病疫苗（HDCV）进行了比较。在菲律宾的一项 II 期随机临床研究中，将 2~11 岁的健康儿童和 12~17 岁的青少年按 2:1 的比例随机分配接受三剂 PVRV-NG 或 HDCV，分别在第 0、7 和 28 天注射。在第一次接种后第 0、42 天和 6 个月测量狂犬病病毒中和抗体，并在接种期间和最后一次注射后 28 天内评估安全性，此外还监测严重不良事件直至最后一次接种后 6 个月。结果发现，两组的 342 名参与者（包括 171 名儿童和 171 名青少年）在第 42 天的狂犬病病毒中和抗体（RVNA）滴度均≥0.5 IU/mL，且超过 90% 的参与者在第 42 天和第 6 个月时 RVNA 滴度仍≥0.5 IU/mL。这一结果表明，PVRV-NG 和 HDCV 的血清转化率相似，每次接种后及最后一剂接种后 6 个月内，两组的不良反应类型和严重程度相似。该研究表明，在暴露前环境中，PVRV-NG 的免疫谱与 HDCV 几乎相同，且耐受性良好，无安全问题，说明 PVRV-NG 有望成为一种良好的人类狂犬病疫苗。
2023 年，Pichon 等人在 Vero 细胞中开发了狂犬病疫苗候选株（PVRV-NG），并将其重新配方为 PVRV-NG2。他们在五项多中心、观察者盲法的 II 期试验中评估了 PVRV-NG，并研究了三种不同剂量（抗原含量）的 PVRV-NG2 与 HDCV（Imovax Rabies®）的安全性和免疫反应。在该试验中，健康成人（N=320）按照 2:2:2:1:1 的比例随机接受 PVRV-NG2（低、中或高剂量）、PVRV-NG 或 HDCV，按照第 0、3、7、14 和 28 天的五剂暴露后方案进行肌肉注射；此外，所有参与者在第 0 天接受人类狂犬病免疫球蛋白肌肉注射。在 0、14、28、42 天和 6 个月后，评估其免疫原性，并计算中和抗体滴度≥0.5 IU/mL 的参与者比例。结果显示，几何平均滴度随抗原含量在每个时间点增加。对于 PVRV-NG2 的几何平均滴度，高剂量最高；然而，中剂量与 HDCV 相似，且该剂量与 PVRV-NG 相似。在安全性方面，PVRV-NG2 与 PVRV-NG 相似，但 PVRV-NG2 或 PVRV-NG（36.7–47.5%）的注射部位反应少于 HDCV（61.5%）。该研究表明，高剂量 PVRV-NG2 的免疫原性和安全性概况可作为比当前 HDCV 疫苗更好的暴露后预防疫苗。
2023 年，Huang 等人开发了一种基于 Vero 细胞的狂犬病疫苗（PVRV-WIBP），并评估了其用于人类的安全性和免疫原性。在 III 期临床试验中，招募了 40 名第 1 阶段参与者和 1956 名第 2 阶段年龄在 10 至 50 岁的受试者。为了评估安全性，第 1 阶段的 20 名参与者接受了四剂或五剂方案的 PVRV-WIBP。在第 2 阶段，1956 名受试者被随机分为三组，分别接受五剂 PVRV-WIBP、五剂 PVRV-LNCD 和四剂 PVRV-WIBP。他们在接种后第 7 或 14 天和第 35 或 42 天测量了针对狂犬病的血清中和抗体滴度，并记录了超过 6 个月的不良事件。在 PVRV-WIBP（4 剂和 5 剂）和 PVRV-LNCD 组中，发现大多数不良反应是轻度的，甚至中度反应在每次注射后 1 周内即可缓解。结果显示，所有三组在初始剂量后 14 天均完全血清转化。与 PVRV-LNCD 组相比，PVRV-WIBP 组（四剂或五剂）的易感受试者在完成完整接种计划后 14 天显示出更高的针对狂犬病病毒的中和抗体滴度。PVRV-WIBP 在 10–50 岁的健康个体中诱导的免疫反应与 PVRV-LNCD 几乎相同，且耐受性良好。该研究表明，PVRV-WIBP（四剂和五剂方案）可作为暴露后预防的替代狂犬病疫苗。
2.基于 Vero 细胞的狂犬病疫苗与人类狂犬病免疫球蛋白联合用于暴露后预防
WHO 建议对 III 类严重狂犬病暴露进行广泛的伤口清洗、立即接种疫苗和注射人类血液来源的狂犬病免疫球蛋白（HRIG）作为暴露后预防。美国疾病控制与预防中心（CDC）也建议狂犬病暴露后预防包括伤口清洗、人类狂犬病免疫球蛋白（HRIG）和四剂系列疫苗。HRIG 仅在暴露后开始时给予一次，且仅给予以前未接种过疫苗的人。HRIG 可提供即时的抗体保护，直到患者能够主动产生自己的抗体，但一些研究表明，HRIG 可能在一定程度上干扰狂犬病疫苗的免疫原性。尽管如此，PVRV-NG 与 HRIG 的联合治疗在一些动物研究和临床试验中已显示出前景。
2022 年，Bernard 等人在仓鼠模型中研究了 HRIG 对基于 Vero 细胞的下一代狂犬病疫苗候选株（PVRV-NG）的干扰，并与标准护理疫苗进行了比较。他们通过四剂暴露后预防方案评估了人类或马源 HRIG 对 PVRV-NG、Verorab® 和 Imovax® Rabies（HDCV）诱导的免疫反应的干扰。对于使用或不使用 HRIG 的疫苗，他们还分别测定了针对狂犬病的血清中和抗体滴度和特异性血清 IgM 滴度。他们暂时发现 HRIG 对 PVRV-NG 的干扰与 PVRV 相似，且在第 7 天倾向于低于 HDCV。结果显示，在仓鼠中，HRIG 对 PVRV-NG 的干扰与标准护理疫苗相似或更低。该研究表明，基于 Vero 细胞的 PVRV-NG 与 HRIG 联合治疗有望用于人类狂犬病的暴露后预防。
2024 年，Pineda-Peña 等人使用与 licensed PVRV（Verorab®）和 HDCV（Imovax Rabies®）相同的 Pitman–Moore 株开发了下一代狂犬病疫苗（PVRV-NG2）。他们评估了 PVRV-NG2 在有和没有 HRIG 肌肉注射情况下的免疫原性和安全性，并与 PVRV+HRIG 和 HDCV+HRIG 在类似的暴露后预防模型中进行了比较。在双中心、改良、双盲 II 期研究中，将 > 18 岁的健康成人（N=640）按 3:1:1:1 的比例随机分配至 PVRV-NG2+HRIG、PVRV+HRIG、HDCV+HRIG 或单独 PVRV-NG2 组，并在第 0、3、7、14 和 28 天作为单一疫苗接种，适用组在第 0 天接种 HRIG。他们在接种后第 0、14、28 和 42 天测定 RVNA 滴度。所有参与者均达到狂犬病病毒中和抗体（RVNA）滴度≥0.5 IU/mL（主要目标），以显示 PVRV-NG2+HRIG 与 PVRV+HRIG 和 HDCV+HRIG 相比的非劣效性。他们还评估了最后一次注射后 6 个月内的不良事件。结果显示，几乎所有参与者（99.6%，PVRV-NG2+HRIG；100%，PVRV+HRIG；98.7%，HDCV+HRIG；100%，单独 PVRV-NG2）在第 28 天达到 RVNA 滴度≥0.5 IU/mL，且各组在所有时间点的几何平均滴度相似。此外，疫苗的安全性概况在 PVRV-NG2 与其他组之间相似。该研究表明，PVRV-NG2+HRIG 的免疫原性和安全性与当前标准护理狂犬病疫苗用于暴露后预防几乎相同，因此 PVRV-NG2+HRIG 有望成为人类狂犬病的联合治疗方案。
3.含佐剂的狂犬病疫苗用于暴露后预防
2023 年，Yu 等人使用 PIKA（一种化学稳定的双链（ds）RNA 类似物，可与 Toll 样受体 3（TLR3）相互作用）作为灭活纯化狂犬病病毒疫苗的佐剂，以促进免疫反应。在动物研究中，他们测试了中国流行的七种狂犬病病毒株。结果表明，PIKA 狂犬病疫苗在小鼠中无需使用免疫球蛋白即可具有超过 80% 的保护效力。PIKA 狂犬病疫苗显示，接种后 5 天内中和抗体水平显著提高，表明比 licensed 狂犬病疫苗诱导了更多的免疫反应。他们发现，PIKA 狂犬病疫苗导致响应抗原产生 IFN-γ 的 T 细胞显著增加。此外，注射 PIKA 狂犬病疫苗后，注射部位的 IL-1β、IL-6、CCL-2 和 TNF-α 水平均升高，结果还表明血清中的趋化蛋白和促炎分子水平增加。通过 TLR3 基因敲除小鼠的试验进一步证实了 PIKA 的作用模式，验证了其功能依赖于 TLR3 途径。该研究表明，PIKA 有潜力作为佐剂，在不使用 HRIG 的情况下显著提高狂犬病疫苗的效力。
4.单克隆抗体组合用于暴露后预防
用于人类狂犬病暴露后预防的被动免疫使用免疫球蛋白，无论是人类单克隆抗体（mAb）还是 HRIG。目前，建议用新兴的 mAb 或 mAb 组合替代传统的 HRIG，因为 HRIG 供应有限且存在潜在的安全风险。
2024 年，Long 等人通过混合两种非竞争性、非重叠的人类单克隆抗体 RM02 和 RM05（质量比 1:1）开发了一种单克隆抗体组合 CRM25。他们发现 CRM25 可以交叉中和狂犬病病毒株，并对所有测试的常见狂犬病病毒和非狂犬病病毒进化群 I 狂犬病毒的感染表现出抑制作用。结果显示，与 HRIG 相比，CRM25 可以保护叙利亚金黄仓鼠免受致命的狂犬病病毒攻击。该研究表明，CRM25 可能成为未来临床试验中狂犬病暴露后预防的潜在治疗候选药物。
四、讨论与未来展望
狂犬病主要通过动物咬伤（尤其是狗）传播，因此动物的暴露前预防至关重要。由于人类不是狂犬病的传播媒介，除了器官移植的情况外，人类仅需职业风险人群进行暴露前预防，而暴露后预防对人类狂犬病的预防至关重要。动物疫苗的开发应侧重于暴露前预防，而人类狂犬病疫苗的开发则侧重于暴露后预防的临床应用。为实现 WHO 到 2030 年根除狂犬病的目标，需突出新型狂犬病/狂犬病毒疫苗的发展和优势。
传统动物疫苗面临的挑战，包括接种覆盖率不足、安全性问题、长期有效性存疑和抵抗力差异等，可能成为动物狂犬病防控推广的障碍。幸运的是，一些新型疫苗候选株有望克服这些限制：例如，使用佐剂的灭活疫苗相对安全且能增强效力；口服减毒疫苗可扩大接种覆盖率；基于 mRNA 的疫苗有可能提供安全、有效且抵抗力较低的疫苗。因此，口服给药的 mRNA 疫苗可被视为未来潜在的动物狂犬病疫苗，尽管冷链要求仍然是一个关键问题，尤其是对于野生动物。
当前的人类狂犬病疫苗通常被视为病原体的治疗性疫苗，因为它们通常用于暴露后针对狂犬病病毒的免疫接种。暴露于狂犬病动物后及时治疗至关重要，因为狂犬病疫苗对已出现临床症状的病毒感染无效，尤其是在病毒侵入中枢神经系统后。当前的人类狂犬病疫苗（如 HDCV、HKCV、PCECV）存在一些缺点，包括免疫反应不完全、副作用、需要多次接种和费用高。因此，PVRV 已成为增强效力和安全性并降低费用的疫苗开发合适对象。Vero 细胞的优点包括许多分裂周期而不衰老、不含动物或人类成分、残留 DNA 含量低，此外，Vero 细胞易于在培养基中低成本培养，可纯化和冻干用于狂犬病疫苗的生产。为了增强效力，可能需要 PVRV 与 HRIG 的组合。然而，HRIG 通常难以获取且昂贵，在一些研究中甚至可能在一定程度上干扰狂犬病疫苗的免疫原性。与 HRIG 相比，佐剂（如 PIKA）和单克隆抗体更容易获取、便宜且安全。因此，添加佐剂或单克隆抗体组合可能是无需使用 HRIG 的狂犬病疫苗的替代选择。
除了 PVRV，基于 mRNA 的疫苗是另一种有前途的人类狂犬病疫苗候选株，尽管需要更多证据来证明其在临床试验中的安全性和有效性。基于 mRNA 的疫苗具有以下几个显著优点： （1）安全且抵抗力较低，因为仅使用病毒遗传物质的一小部分；（2）剂量率低；（3）狂犬病病毒逆转的可能性最低；（4）插入突变的风险低；（5）效力高；（6）开发周期加快；（7）潜在的低成本生产。此外，在一些动物研究中，基于 mRNA 的疫苗已被证明可有效诱导针对狂犬病的细胞免疫和体液免疫。
当前用于人类的 mRNA 疫苗主要通过肌肉或皮下注射给药。为了减少疼痛、压力、成本和接种的专业要求，非侵入性途径（包括口服和气雾剂递送，如鼻内和口服吸入）正成为动物疫苗的首选途径。因此，需要设计新的载体来提高这些非侵入性给药途径的 mRNA 疫苗的效力和稳定性。科学家必须评估天然动物中 mRNA 疫苗引起的不良事件和过敏反应。此外，需要开发安全有效的递送工具（如纳米颗粒、病毒、病毒样颗粒）来保护 mRNA 疫苗在动物体内免受消化和变性。目前，由于需要昂贵的递送工具和冷链，mRNA 疫苗的费用仍然很高。如果未来能够以低成本和高质量开发 mRNA 疫苗，这对人类和动物狂犬病的预防将极为重要。返回搜狐，查看更多